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Myosin Va RNAi慢病毒载体的构建及对肺癌PG细胞运动和迁移能力的影响

蓝林祥、杜艳涛、赵威、张志谦

2009Chieh P'ou Hsueh PaoBiochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 1

摘要

目的构建人非常规肌球蛋白myosinVa基因RNAi慢病毒载体，并探讨其对人肺巨细胞癌PG细胞运动和迁移能力的影响。方法针对已经筛选确定的myosinVa基因RNAi有效靶序列，合成靶序列及其阴性对照的寡聚DNA，并连接到pSuper载体获得中间实验质粒pSuper-shM5A及阴性对照pSuper-shCON；然后将H1promoter．shM5A／shCON表达框重组到慢病毒载体plenti4上，分别得到plenti4．H1。shM5A和shCON载体，并进行慢病毒包装。随后用病毒上清感染Pc细胞，并筛选出zeocin抗性的稳定细胞系PG-shM5A和shCON。通过RT-PCR方法检测PG—shM5A和shCON细胞的myosinVamRNA表达水平；用创伤愈合和Boyden小室实验测定PG．shM5A和shCON细胞的运动和迁移能力。结果限制性内切酶酶切和测序证实，成功构建myosinVaRNAi慢病毒载体plenti4-H1-shM5A。慢病毒包装成功后，感染PG细胞并获得zeocin抗性的细胞；用RT-PCR方法证明，myos抽VamRNA被抑制70％以上。创伤愈合和Boyden小室实验表明，感染携带myosinVaRNAi慢病毒的PG细胞运动和迁移能力显著下凋。结论成功构建myosinVaRNAi慢病毒载体plenti4-H1-shM5A，它能有效抑制人肺巨细胞癌PG细胞的myosinVa表达并降低其运动和迁移能力，初步揭示了myosinVa与肿瘤细胞恶性行为的相关性。

引用本文（GB/T 7714）

DOI：https://doi.org/10.3969/j.issn.0529-1356.2009.06.009