T4 溶菌酶在多型汉逊酵母中的表达及抑菌活性测定
摘要
溶菌酶是一类对多种细菌都具有明显杀菌效果的蛋白质. 本研究将T4 溶菌酶基因构 建到毕赤酵母表达载体pPIC9K 中, 以汉逊酵母A16 来源的rDNA 序列作为同源重组序列, 在毕赤酵母甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子(pGAP)的调控下, 使T4 溶菌酶在汉逊酵母A16 中以组成型方式稳定高效表达. 在37℃, pH 6.0, 摇瓶发酵培养72 h 后, 表达量达到0.49 g/L. 结果表明, 汉逊酵母能够识别源自毕赤酵母的甘油醛-3-磷酸脱氢酶启动子和醇氧化酶终止子序列, 而且 rDNA 作为同源重组序列可以产生多拷贝的汉逊酵母重组子. 对重组蛋白进行了N 端测序、质 谱及SDS-PAGE 检测, 发现重组蛋白N 端与T4 溶菌酶N 端氨基酸序列一致, 分子量大小约为 18.7 kD, 与预计分子量大小相符. 重组T4溶菌酶对革兰氏阳性和阴性细菌都具有抑菌活性和溶壁活性. 非变性SDS-PAGE(无DTT)检测发现, 重组T4 溶菌酶形成了分子内二硫键和少量分子间二硫键, 这种不正确的二硫键可能导致重组T4 溶菌酶损失部分抗菌活性.
引用本文（GB/T 7714）
刚强 李, 楠 王, 德虎 刘, 等. T4 溶菌酶在多型汉逊酵母中的表达及抑菌活性测定[J]. Scientia Sinica Vitae, 2011.
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