H2O2 诱导的肝星状细胞凋亡以及凋亡后细胞外基质代谢的变化
摘要
目的： 探索肝纤维化的病理过程，明确活化的肝星状细胞对细胞外基质（ECM）的增殖、收缩和分泌作用，同时进一步分析H2O2 对肝星状细胞（HSC）凋亡的诱导途径、凋亡情况、凋亡后 ECM 代谢的变化情况。 方法： 选取 2019 年 4 月某研究院浓度为 10% 的胎牛血清 DMEM 培养 HSC-T6 作为研究对象。胎牛血清在传代后，换无血清培养基培养。将其分为两组，对照组分为三组，对照 1 组为正常的 HSC-T6，于培养 8h 收获；对照 2 组为正常 HSC-T6，于培养 24h 收获；对照 3 组为正常 HSC-T6，于培养 8h 更换新鲜培养基 24h 后收获。模型组分为三组，模型 1 组加入的 H2O2 浓度为 100nmol/L，于培养 8h收获；模型 2 组加入的 H2O2 浓度为 100nmol/L，于培养 24h 收获；模型 3 组加入的 H2O2 浓度为 100nmol/L，于培养 8h 更换新鲜培养基 24h 后收获。 结果： 对照组 1 组，培养 8h 收获的早期凋亡细胞 1.96%，晚期凋亡、死亡细胞 3.6%，凋亡率为 5.56%。对照组 2 组，培养 24h 的早期凋亡细胞7.52%，晚期凋亡、死亡细胞 6.23%，凋亡率为 13.75%。对照组 3 组，培养 8h 更换新鲜培养基 24h 后收获的早期凋亡细胞 6.29%，晚期凋亡、死亡细胞 6.29%，凋亡率为 12.58%。B 组 TIMP-1 ＞ A 组 TIMP-1＞ C 组 TIMP-1。A 组 MMP-2 ≈ B 组 MMP-2 ＞ C 组 MMP-2。B 组 MMP-2 ≈ C 组 MMP-2 ＞ A 组 MMP-2。B 组MMP9 ≈ C 组 MMP9 ＞ A 组 MMP9。A 组 COL Ⅰ A ＞ B 组 COL Ⅰ A ＞ C 组 COL Ⅰ A。A 组 COL Ⅲ＞ B 组 COL Ⅲ＞C 组 COL Ⅲ。COL Ⅰ变化梯度超过 COL Ⅲ。 结论： HSC-T6 培养期间，凋亡率与时间成正比，更换新鲜培养基对凋亡无影响。在凋亡早期：TIMP-1 上升明显，COL Ⅰ、COL Ⅲ高表达，MMP-2、MMP-9 较少，HSC 凋亡数量增加、TIMP-1 升高，HSC 抗凋亡能力强。在凋亡晚期：TIMP-1、COL Ⅰ、COL Ⅲ表达减少，MMP-2、MMP-9 表达增高，凋亡能力增加。