Zacopride通过PKA途径选择性激动大鼠心肌Kir2.1通道
摘要
前期研究发现促胃肠动力药zacopride (5-HT<sub>4</sub>受体激动剂兼5-HT<sub>3</sub>受体拮抗剂)通过选择性激动大鼠心室肌内向整流钾电流(inward rectifier potassium current, I<sub>K1</sub>)表现出抗室性心律失常无房性致心律失常作用, 本研究旨在探讨zacopride这一独特的药理特性的分子机制. 采用胶原酶法急性分离大鼠心房肌细胞; 利用全细胞膜片钳技术观察zacopride对大鼠心房肌细胞I<sub>K1</sub>电流、细胞跨膜电位和在HEK293细胞上表达的大鼠心肌Kir2.1, Kir2.2, Kir2.3通道和磷酸化位点突变的Kir2.1(S425L)通道的效应, 以及干预5-HT受体和干预PKA, PKC, PKG信号通路的工具药对zacopride调节<italic>I</italic><sub>K1</sub>作用的影响. 运用Western Blot分析大鼠心房肌及心室肌kir2.x通道构成. 结果表明, zacopride对大鼠心房肌细胞<italic>I</italic><sub>K1</sub>电流及跨膜电位无显著影响; 可使HEK293细胞上表达的同源Kir2.1外向电流增加40.7%±9.7%(在-50 mV, <italic>P</italic><0.01), 而对同源Kir2.2、同源Kir2.3及异源Kir2.1+Kir2.2, Kir2.1+Kir2.3和Kir2.2+Kir2.3通道电流均无明显作用. Western Blot分析显示, Kir2.3表达量在大鼠心房及心室无明显差异, 而大鼠心房Kir2.1的表达量仅为心室相应量的25%; HEK293细胞上5-HT<sub>3</sub>受体缺失, 5-HT<sub>4</sub>受体呈低表达水平. PKA抑制剂能够显著抑制zacopride激动Kir2.1电流的效应, 而PKC, PKG抑制剂不能影响这一效应; zacopride在-50 mV可使Kir2.1 S425L突变体电流增加13.3%±6.5%, 但无统计学意义(<italic>P</italic>>0.05). 以上结果提示, zacopride激动Kir2.1电流的效应是经AC/cAMP/PKA信号通路介导的, 而与其对5-HT<sub>3</sub>和5-HT<sub>4</sub>受体的作用无关.