猪繁殖与呼吸综合征病毒在抗体免疫选择压下的变异
摘要
为了确定抗体选择压对PRRSV不同基因变异的影响, 将PRRSV野毒株SD0612分别在Marc-145细胞上做两个系列的连续传代, 系列Ⅰ培养液中不添加抗SD0612血清, 包括A, B, C 3个平行的传代系; 系列Ⅱ培养液中添加一定比例的抗SD0612血清, 包括D, E, F 3个平行的传代系. 上述传代系连续传代40代, 其中有抗体组40代突变株F40获得抗血清后按同样方法连续传代40代进行第二轮抗体选择压实验. 各传代系每隔10代收获病毒并对其<italic>ORF3</italic>, <italic>ORF4</italic>和<italic>ORF5</italic>进行扩增、克隆和序列分析. SD0612及其两次传代中有抗体组40代毒突变株F40和e40接种猪后收获血清, 进行3个毒株之间的交叉血清中和实验以测定其抗原相关性系数. 序列分析显示, 两次传代中有抗体组在<italic>ORF3</italic>, <italic>ORF4</italic>, <italic>ORF5</italic>的有义突变与无义突变比值(NS/S)分别为11.0和3.5, 0.5和0.67, 13.0和4.0; 无抗体组NS/S比值则仅为0.33~1.40. 有抗体组<italic>ORF5</italic>和<italic>ORF3</italic>分别有14和4个稳定的氨基酸突变位点, 而这些位点在无抗体组未被发现. 交叉血清中和实验结果显示, SD0612与有抗体组突变株F40和e40的抗原性相关系数分别为0.625和0.5. 上述结果表明, 抗体的选择压能够显著影响PRRSV的<italic>ORF5</italic>和<italic>ORF3</italic>的基因变异并能使其抗原性发生改变.