用酵母双杂交系统筛选与NifA相互作用的蛋白质
摘要
利用酵母双杂合系统从巴西固氮螺菌(<I>Azospirillum brasilense</I>)Sp中筛选与NifA有直接相互作用的蛋白质因子. 首先将<I>nifA</I>基因克隆到pGBD-C2载体上, 构建成诱饵质粒pGBD-<I>nifA</I>, 接着将巴西固氮螺菌的染色体DNA构建在pGAD-C1, pGAD-C2和pGAD-C3质粒载体上, 形成3个质粒文库YSPC1, YSPC2和YSPC3. 然后以pGBD-<I>nifA</I>为诱饵, 对YSPC1, YSPC2和YSPC3这3个文库进行了筛选, 得到11个阳性克隆. DNA序列分析表明, 这11个阳性克隆分为4类, 包含4个1~1.3 kb不同的基因片段. 对这4个基因片段进行同源性比较发现, 其中2个编码的蛋白质含有与信号传递有关的PAS结构域, 另外1个基因片段含有与吸收铁有关的<I>fhuE</I>基因, 另一个是未知蛋白. 将这4个基因片段从原来的pGAD载体转移到pGBD载体, 即互换换载体后, 它们仍然与NifA有相互作用; 对这4个基因片段进行移码突变则不再与NifA有相互作用, 说明了它们与NifA相互作用的特异性.
引用本文（GB/T 7714）
然 涂, 文改 孙, 三凤 陈, 等. 用酵母双杂交系统筛选与NifA相互作用的蛋白质[J]. Chinese Science Bulletin (Chinese Version), 2005.
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