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利用CRISPR-Cas9技术构建敲除 VDH 的产香兰素拟无枝酸菌

郑义培、Zheng Yipei、吴丹、Dan Wu、郑璞、Pu Zheng

2021Environmental Science被引 1

摘要

目的建立适用于拟无枝酸菌（Amycolatopsis sp.）的CRISPR-Cas9基因编辑系统，敲除其编码香兰素脱氢酶基因（VDH），减少发酵副产物香草酸。 方法以VDH为靶标基因，将pKCcas9dO质粒上的tipA、j23119启动子分别替换为pRLE6质粒Kmr启动子、链霉菌中常用的强启动子permE*，同时将sgRNA替换为能识别靶基因香兰素脱氢酶的特异性sgRNA，获得质粒pKCKmCas9VDH。然后将其与靶基因的上下游同源臂连接，获得敲除质粒pLYZYP01。将pLYZYP01质粒电转进Amycolatopsis sp.感受态细胞，筛选获得VDH的敲除突变体菌株。 结果利用上述方法，成功获得VDH敲除菌株Amycolatopsis sp.ΔVDH。 结论建立了适用于拟无枝酸菌CCTCC M 2011265的基因敲除系统，成功敲除VDH基因，在添加12 g/L底物阿魏酸的情况下，香兰素产量达到9.19 g/L，摩尔转化率由88.6%提高到97.7%。

引用本文（GB/T 7714）

DOI：https://doi.org/10.13343/j.cnki.wsxb.20210082