Functional expression of a Bombyx mori cocoonase： potential application for silk degumming
摘要
茧，为到丝绸蛾的幼虫的开发的一个躲蔽处，包含含纤维的蛋白质丝心蛋白，它由球状的蛋白质丝胶是涂的。丝绸蛾的出现要求 cocoonase 的行动，朊酶由蛹藏匿了。全身的 prococoonase cDNA，与 780 bp 编码 260 氨基酸的开的读框架，被反向的抄写从 6-day-old 的头的全部的 RNA 克隆泰国丝绸的 Bombyx mori 蛹。缺乏编码顺序的 propeptide 的仅仅基因碎片成功地在 Pichia pastoris 被表示，产出细胞外地活跃的 cocoonase。recombinant cocoonase 被 80% 铵硫酸盐分别和 CM-Sepharose 层析净化到同质，并且它的内部肽序列被 nano 液体层析团 spectrometry/mass spectrometry 分析。这 monomeric 蛋白质由钠 dodecyl sulphate-polyacrylamide 胶化电气泳动由胶化排除分析和 25 kDa 子单元尺寸有 26 kDa 的本国的分子的重量。酶 hydrolyses 丝胶但是不做 hydrolyse 丝心蛋白，在薄层的酶试金上由光线的散开出现 RD 茶) 。扫描电子显微镜学证明那净化的 recombinant cocoonase 能在 24 h 完全把丝胶从自然丝绸移开，没有损坏丝心蛋白，用由 RD 茶决定了的酶的 1 个仅仅使不能调动的丝胶单位(ISU ) 。从 B 孤立的自然 cocoonase。mori 蛹能也有效地消化丝胶，但是要求更多的酶(2 ISU ) 和更长的时间(48 h ) 。在比较，商业酶， alcalase，与一样的活动丝胶的不仅显示出的不太完全的消化而且丝心蛋白的引起的损坏。这些结果建议那 recombinant B。mori cocoonase 为使脱胶的丝绸是潜在地有用的。