Analysis of Specific Binding and Subcellular Localization of Wheat ERF Transcription Factor W17
摘要
学习试图检测潜水艇细胞的本地化小块土地(乙烯应答的元素绑定因素) 抄写因素 W17 蛋白质，在 W17 和行动 cis 之间的相互作用规章的元素 GCC 盒子和 DRE 试管内，绑定和 transactivating 能力体内，和在高等植物压力信号的 W17 的角色小径。重组体原生质标志 W17/163hGFP 被介绍进洋葱由有 PDS1000/He 的粒子轰炸方法的表皮的房间。转变房间被孵化因为在在黑暗、绿的荧光的 22 ° C 的 24 h 在一台共焦的显微镜下面被监视。基因 W17 在原核生物的表示向量 pGEX-4T-1 是 GST (glutathione-S-transferase ) 的熔化 N 终点然后转变了成 E。关口 i 拉紧 BL21 (DE3 ) 。IPTG (0.5 mmol L ? 1 ) 被增加为 3 h 导致重组体 GST/W17 的表示。熔化蛋白质被 GST 纯化列净化，然后与一个 32P 标签 GCC 或 DRE 序列使遭到了到胶化延迟试金。不同记者和受动器原生质标志通过 agroinfiltration 被介绍进烟草叶子，然后转变的叶子由 X-Gluc 染色了，与 75% 酒精褪色并且在一台 Stereozooming 显微镜下面监视了。与 W17 蛋白质熔化的 GFP 在原子核是局部性的；SDS 页试金证明熔化蛋白质 GST/W17 能在 IPTG 的正式就职下面在约 42.2 kD 与分子量被导致并且净化。净化的熔化蛋白质能明确地绑在野类型的 GCC 盒子和 DRE 元素，但是没与变异的 DRE 或 GCC 盒子有相互作用；W17 蛋白质能把下游的 GUS 基因体内绑在 GCC 盒子和 transactive。W17 能本地化进原子核，并且它可以 GCC 盒子控制的关於生命的压力涉及不仅，而且在不能生活的压力(例如，盐 --) 导致的发信号的小径。