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长春花萜类吲哚生物碱生物合成途径中重要酶(DXR、SLS、G10H、STR)基因的克隆与表达

安志刚、Thomas Rausch、祖元刚

2007Zhiwu yanjiuBiochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 1

摘要

以分离提取的2周龄长春花植物幼苗总RNA为模板，经两步Gateway-PCR反应扩增得到长春花萜类吲哚生物碱合成途径中编码重要酶：5-磷酸脱氧木酮糖还原酶（DXR）、次番木鳖苷合成酶（SLS）、栊牛儿醇-10羟化酶（G10H）和异胡豆苷合成酶（STR）的cDNA基因片段。利用BP重组酶将扩增片段克隆到Gateway化的入门载体pDONR201中，并进行测序验证。测序后的基因通过LR重组酶的作用转移到带有HIS标签的目标载体pETG10A中，构成重组表达质粒，转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导得到了高效表达，通过Ni-TED树脂纯化方法得到了高纯度的蛋白。

引用本文（GB/T 7714）

DOI：https://doi.org/10.7525/j.issn.1673-5102.2007.05.013