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缺氧条件下大鼠髓核细胞中缺氧诱导因子 1α 与自噬相关分子的表达及相关性分析

程傲、何鹏杰、张俊宇、郑伟伟、杨民

2020Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 1

摘要

目的探讨缺氧条件下大鼠髓核细胞中缺氧诱导因子 1α（hypoxia inducible factor 1α，HIF-1α）与自噬相关分子 Beclin1、LC3B 的表达及其相关性。方法取健康成年 SD 大鼠髓核组织，分离培养髓核细胞并传代。取第 3 代髓核细胞行 HE 染色和Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色鉴定后，随机分为 4 组。A 组细胞于常氧条件下（37℃、5%CO2、20%O2）培养，B 组细胞于缺氧条件下（37℃、5%CO2、1%O2）培养，C 组细胞转染 HIF-1α-小干扰 RNA 后于缺氧条件下培养，D 组细胞加入自噬抑制剂 3-MA 后于缺氧条件下培养。各组细胞培养 8 h 后，采用 Western blot 和实时荧光定量 PCR（real-time fluorescence quantitative PCR，qRT-PCR）检测 HIF-1α 与自噬相关分子 Beclin1、LC3B 的表达情况。结果经分离纯化的第 3 代大鼠髓核细胞 HE 染色后细胞质呈淡粉色，细胞核呈蓝黑色；Ⅱ型胶原酶免疫荧光染色为阳性。Western blot 和 qRT-PCR 检测示，B 组 HIF-1α、Beclin1 和 LC3B 蛋白及 mRNA 相对表达量均显著高于 A 组（P 0.05），Beclin1 和 LC3B 蛋白和 mRNA 相对表达量均较 B 组显著降低（P<0.05）。结论缺氧条件能诱导大鼠髓核细胞中 HIF-1α 和自噬相关分子 Beclin1、LC3B 的表达，且 HIF-1α 与自噬相关分子的表达具有相关性，即 HIF-1α 下调能降低自噬相关分子的表达，而缺氧条件下自噬水平下调对 HIF-1α 的表达无明显影响。

引用本文（GB/T 7714）