重组K-<italic>Ras</italic>突变基因在胰腺癌Bxpc-3细胞株中的表达及其对化疗药物药效的影响
摘要
K-<italic>Ras</italic>是<italic>Ras</italic>基因家族中的一员, 在细胞生存、增殖和分化过程中发挥重要作用. 当<italic>Ras</italic>基因发生突变时, 其表达的Ras蛋白可能被过度激活, 从而导致肿瘤的产生和发展. 胰腺癌中K-<italic>Ras</italic>的突变频率较高, 但其对胰腺癌化疗药物药效的影响尚不明确. 本文以pAcGFP1-C3质粒为载体构建了含有5种不同基因型K-<italic>Ras</italic>序列的重组质粒, 分别为野生型和<italic>G12V</italic>, <italic>G12R</italic>, <italic>G12D</italic>, <italic>G13D </italic>4种突变型. 将上述重组质粒转入人胰腺癌Bxpc-3细胞株并筛得稳转株. 结果显示, 转染野生型和突变型K-<italic>Ras</italic>的细胞株具有相似的生长速度, 且细胞中K-Ras-GFP融合蛋白的表达量也一致. 药效学研究显示, 转染突变型K-<italic>Ras</italic>基因的细胞对吉非替尼、5-氟尿嘧啶、多西他赛和吉西他滨的药物敏感性降低, 而对厄罗替尼和顺铂的药效则无显著影响, 这可能与转染突变型K-<italic>Ras</italic>基因的细胞中K-<italic>Ras</italic>下游信号p-Akt和p-Erk的水平升高有关. 此外, 转染不同突变型K-<italic>Ras</italic>导致的药效及p-Akt, p-Erk的表达变化也不同. 体外研究结果表明, K-<italic>Ras</italic>突变细胞对多种化疗药物的药效敏感性降低, 同时不同突变型细胞之间药效也有差异, 该结果有待进一步深入研究.