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SV40PolyA 片段串联拷贝数目影响GFP 报告基因表达

英 谢、欢 马、秀芳 王、钦清 杨、占军 吕、晶晶 冯、康 尹

2011Scientia Sinica VitaeAgricultural and Biological Sciences被引 1开放获取

摘要

Alu元件(约280 bp)是人类基因组中的重要重复序列, 串联Alu呈长度依赖性下调GFP 报告基因表达, 在Alu 串联序列上游正向或反向插入SV40PolyA(简称PolyA, 240 bp), 解除Alu 串联序列对GFP 基因的抑制作用. PCR 法扩增PolyA 反序(PolyAas)不同位置的60 bp 片段, 插 入pAlu14 质粒(14 个Alu 正向串联插入pEGFP-C1)的GFP 基因和Alu14 之间, 瞬时转染HeLa 细胞, 通过荧光显微镜观察和Northern 检测, 1F1R(PolyAas 5′端第1 个60 bp 片段)和4F4R(自 PolyAas 5′端计算第4 个60 bp 片段)不能活化基因; 2F2R 和3F3R(PolyAas 中间的2 段)可以解 除Alu14 对GFP 基因的抑制作用. 将2F2R 和3F3R 各自反复首尾串联, 分别插入pAlu14 质粒 GFP 基因和Alu 串联序列之间, 瞬时转染HeLa 细胞, 用插入4 个2F2R 的pAlu28, 插入4 个 3F3R 的pAlu18, 插入4 个3F3R 的pAlu28 作长度对照, 以排除由于插入片段长度增加可能对 结果造成的干扰, 发现2~4 个拷贝的2F2R 和3F3R 活化基因作用高于一个拷贝的同样片段, 但 是多于8 拷贝以后, 活化GFP 基因作用减弱. 本实验证明, SV40 PolyAas 至少含有两段活化基 因序列, 活化基因序列(2F2R, 3F3R)的最适活化基因条件需要合适的拷贝数.

引用本文（GB/T 7714）

DOI：https://doi.org/10.1360/zc2011-41-3-187