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检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用

郭紫晶、Zijing Guo、何琪富、HE Qifu、汤承、Tang Cheng、张斌、Bin Zhang

2018畜牧兽医学报Medicine被引 1

摘要

纽布病毒（nebovirus，NeV）是国内新发的犊牛腹泻病原，本试验目的是建立检测NeV的real-time RT-PCR方法。根据国内NeV流行株的聚合酶基因（RdRp）序列设计引物，通过反应条件和体系优化，成功建立基于TB Green检测NeV的real-time RT-PCR方法。结果显示：该方法在2.9×101~2.9×109 copies·μL-1之间呈现良好的线性关系，线性相关系数R2=0.999 4，扩增效率为98%；该方法只特异性检出NeV，不检出常见无关病原；最低检测下限为29 copies·μL-1；批内和批间的变异系数分别为0.89%~1.89%和0.83%~1.15%；该方法对临床样本的检出率高于文献报道的三种检测方法（P < 0.05）。对2018年8-11月采自新疆和辽宁的135份奶犊牛腹泻样本中NeV的检出率为67.41%，场阳性率为100%（15/15）。所建方法的特异性和稳定性好、灵敏度高，为NeV的检测和流行病学调查提供了有力的手段。

引用本文（GB/T 7714）

DOI：https://doi.org/10.11843/j.issn.0366-6964.2019.04.023