Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧损伤中的作用
摘要
目的评价Fas/caspase-8/3和细胞外信号调节激酶(extracellular signaling-regulated kinase，ERK)信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation，H/R)损伤中的作用。 方法培养H9c2心肌细胞，随机分为4组(n=3)：①正常对照组：H9c2细胞置于DMEM/F12细胞培养液中培养；②H/R组：将H9c2细胞进行5 h缺氧和1 h复氧处理；③Fas siRNA组(H/R+Fas-siRNA)：H9c2细胞转染Fas siRNA 24 h后进行H/R损伤；④siRNA阴性对照组(H/R+siRNA-NC)：H9c2细胞转染Fas siRNA-NC 24 h后进行H/R损伤。处理结束后，采用CCK-8法检测细胞活力；微量酶标法测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性；Annexin-V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡；荧光定量RT-PCR法检测细胞Fas mRNA表达水平；Western blot法检测细胞内Fas、caspase-8/3、ERK和GSK-3β蛋白表达。 结果与对照组相比，H/R组细胞活力降低，LDH活性和细胞凋亡增加，Fas mRNA及蛋白水平升高，cleaved caspase-8/3、p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达升高(P＜0.05)；与H/R组相比，H/R+Fas-siRNA组细胞活力明显提高，LDH活性和细胞凋亡率降低，Fas mRNA及蛋白表达水平降低，cleaved caspase-8/3蛋白表达降低，p-ERK、p-GSK-3β蛋白表达增高(P＜0.05)，而H/R+siRNA-NC组上述指标差异无统计学意义。 结论Fas/caspase-8/3和ERK信号通路在Fas siRNA减轻心肌细胞H/R损伤中发挥着重要作用。