根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解代谢中 agnE 基因的克隆与功能鉴定
摘要
目的本研究对尼古丁降解菌根癌土壤杆菌SCUEC1菌株中agnE基因进行克隆表达，并对agnE基因表达蛋白进行功能鉴定。 方法通过PCR扩增获得agnE全长基因（1029 bp），构建重组质粒pET28a-agnE，转化大肠杆菌BL21（DE3）菌株进行异源表达，采用SDS-PAGE检测重组蛋白。以2，5-二羟基吡啶作为反应底物，在检测波长320 nm下测定反应液吸光度值，进一步研究温度、pH值和金属离子对AgnE蛋白酶活性的影响。 结果克隆得到基因agnE，构建了pET28a-agnE重组质粒并进行了表达，AgnE蛋白分子量为42.0 kDa，表达蛋白以包涵体形式存在于细胞中。酶促反应0、5、10、20 min时反应液吸光度分别为0.6170、0.2273、0.0907、0.0667。在pH 8.0、温度20 ℃下，AgnE蛋白具有较高的2，5-二羟基吡啶双加氧酶活性，且Fe2+对酶活性具有明显的促进作用。 结论明确了AgnE蛋白具有2，5-二羟基吡啶双加氧酶活性。
引用本文（GB/T 7714）
皮婷, Pi Ting, 姚家成, 等. 根癌土壤杆菌SCUEC1菌株尼古丁降解代谢中 agnE 基因的克隆与功能鉴定[J]. 未知来源, 2018.
引文网络
本站仅收录题录与摘要供学习参考，全文版权归属出版方；如有侵权请联系我们删除。