积磷小月菌调控蛋白Mlp21700的异源表达及其与多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子的结合
摘要
背景积磷小月菌(Microlunatus phosphovorus)是重要的聚磷微生物，在好氧条件下积累聚磷酸盐并在厌氧条件分解聚磷酸盐，这个过程可能受到精细的基因调控。 目的利用凝胶迁移实验(EMSA)分析调控蛋白Mlp21700结合的多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子，找到Mlp21700可能的调控靶点。 方法以积磷小月菌JN459菌株的基因组DNA为模板，PCR扩增Mlp21700编码序列，构建重组质粒pET28a-21700并转化到大肠杆菌Transetta(DE3)菌株，诱导表达后采用非变性方法纯化获得Mlp21700融合蛋白。利用PCR方法分别扩增各个Poly-P代谢基因的启动子，用生物素标记后作为探针。采用EMSA分析Mlp21700在试验条件下是否结合启动子以及结合强度。 结果DNA测序和酶切验证表明pET28a-21700携带正确的Mlp21700编码序列。SDS-PAGE分析显示试验条件下Transetta(DE3)菌株大量表达可溶性Mlp21700，纯化的重组Mlp21700蛋白纯度大于90%，含量为0.64 mg/mL。EMSA分析表明在试验条件下Mlp21700能够结合Mlp26610基因ppgk和Mlp44770基因ppx的启动子。 结论调控蛋白Mlp21700可能参与Mlp26610和Mlp44770基因的转录调控，进而调控Poly-P的分解过程。
引用本文（GB/T 7714）
钟传青, Chuanqing Zhong, Wang Jing, 等. 积磷小月菌调控蛋白Mlp21700的异源表达及其与多聚磷酸盐(Poly-P)代谢基因启动子的结合[J]. 未知来源, 2018.
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