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苹果树腐烂病菌细胞色素P450基因 Vmcyp5 的功能

高明煜、Mingyu Gao、吴玉星、Wu Yuxing、朱百涛、Zhu Baitao、高小宁、Gao Xiaoning

2018Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 1

摘要

目的 研究表明，细胞色素P450（CYP）在死体营养型真菌的毒素合成代谢中发挥重要作用，预测可能与病原菌致病相关。论文对苹果树腐烂病菌（Valsa mali）毒素合成基因簇中的1个上调表达的CYP基因Vmcyp5进行生物学功能研究，明确CYP基因对病原菌致病力影响，为细胞色素P450基因家族对苹果树腐烂病菌致病机理的进一步研究提供依据。 方法 通过Double-joint PCR和PEG介导的原生质体转化技术获得具有G418抗性的突变体，并对突变体进行PCR检测及Southern blotting验证得到单拷贝敲除突变体。将目的基因片段重新导入敲除突变体，筛选获得互补突变体。最终对野生型菌株及敲除突变体、互补突变体进行菌落、产孢及致病力观察，利用SPSS软件对数据进行差异显著性分析，并利用qRT-PCR技术分析突变体黑色素基因簇的表达水平。 结果 通过基因敲除技术获得1个Vmcyp5基因的敲除突变体。与野生型菌株相比，Vmcyp5基因的敲除突变体菌落呈白色，产孢量减少51.3%。qRT-PCR分析发现敲除突变体黑色素基因簇基因表达量降低。重要的是，敲除突变体致病力较野生型菌株降低24.5%。互补突变体菌落颜色、产孢及致病力近似恢复至野生型菌株水平。 结论 Vmcyp5基因与病原菌黑色素合成、子实体的产生和致病力相关。

引用本文（GB/T 7714）

DOI：https://doi.org/10.13343/j.cnki.wsxb.20170121