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猪 ADAM 10基因编码区及其剪接体克隆、序列分析与组织表达研究

陈闻达、裴悦、周晓龙、赵阿勇、杨松柏

2017畜牧兽医学报Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 1

摘要

旨在克隆猪ADAM10基因及其剪接体的编码区（Coding sequence，CDS），利用生物信息学方法分析其序列结构和生物学功能，并揭示ADAM10基因及其剪接体mRNA在猪组织中的表达特征。根据GenBank中公布的猪ADAM10基因的序列信息，设计特异性引物，运用反转录PCR（Reverse transcription-PCR，RT-PCR）方法结合T/A克隆技术进行ADAM10基因及其剪接体编码区的克隆，利用生物信息学方法分析ADAM10及其剪接体蛋白的结构，同时用半定量PCR（Semi-quantitative PCR）分析猪ADAM10基因完整型及其剪接体mRNA在猪不同组织中的表达谱。结果显示，克隆和测序获得两种ADAM10 CDS序列，其中完整型CDS长2 247 bp，编码748个氨基酸；剪接型CDS缺失外显子2~7和部分外显子8，其长度为1 344 bp，编码447个氨基酸。和完整型蛋白相比，猪ADAM10剪接体编码的蛋白不存在前引导序列，但存在完整的信号肽序列和跨膜结构域，并含有金属蛋白酶域和解聚素结构域，其三级结构也和完整型一致。序列比对和进化树分析表明，猪ADAM10完整型蛋白在物种间具有较高的保守性。半定量PCR分析表明，ADAM10基因完整型mRNA在脾中表达量较高，在肾、乳腺、腿肌、输卵管、卵巢、子宫、小肠等组织中低水平表达；ADAM10基因剪接体mRNA在肺中表达量较高，在脾和胃中也有低水平表达。本研究为进一步探究猪ADAM10基因的结构和生物学功能提供了基础资料。

引用本文（GB/T 7714）

DOI：https://doi.org/10.11843/j.issn.0366-6964.2017.09.003