半滑舌鳎( Cynoglossus semilaevis ) gnrh 2基因克隆、组织分布及卵巢成熟过程中表达分析
摘要
为了研究下丘脑神经肽促性腺激素释放激素(Gonadotropin-releasing hormone 2, GnRH2)在半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)卵巢成熟过程中的生理作用，本研究通过RT-PCR及RACE方法获得了半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列；通过实时荧光定量PCR (qPCR)对gnrh2 mRNA的组织分布以及卵巢成熟过程中的时空表达特性进行了分析。结果显示，半滑舌鳎GnRH2全长cDNA序列为538 bp (不包括polyA尾)，其中，5'非编码区(Untranslated region, UTR)为154 bp，3'UTR为126 bp，开放阅读框(Open reading frame, ORF)为258 bp，编码85个氨基酸的前体多肽，其分子量及等电点分别为9.69 kDa和8.55。GnRH2前体多肽由信号肽、GnRH2十肽、酶切位点(GKR)以及GnRH相关肽共4部分组成。序列比对分析发现，GnRH2在鱼类中同源性极高，尤其是十肽(QHWSHGWYPG)在所有硬骨鱼类中完全相同。半滑舌鳎GnRH2与鲈形目同源性最高(89.41%-90.59%)，其次为鲽形目、鲑形目和鲀形目(78.82%-85.88%)，与鲤形目同源性最低(61.18%-71.76%)。gnrh2 mRNA主要在脑中表达，在垂体及其他外周组织中表达量极低。此外，组织学分析显示，半滑舌鳎卵巢发育共分为5个时期(Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ和Ⅵ期)。在卵巢成熟过程中，脑gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成期(Ⅲ期)显著性增加，达到峰值；随后表达量急剧下降，在成熟期(Ⅴ期)达到最小值；在排卵后期(Ⅵ期)又显著性增加。然而，在卵巢成熟过程中，垂体gnrh2 mRNA表达量在卵黄生成后期(Ⅳ期)显著性降低，随后在成熟期(Ⅴ期)有所增加，但在排卵后期(Ⅵ期)又急剧下降。上述研究结果表明，脑GnRH2可能参与了半滑舌鳎卵巢发育过程。