玉米C<sub>4 </sub>型<I>pepc</I>基因的分子克隆及其在小麦的转基因研究
摘要
通过LA-PCR方法, 从当地玉米材料中获得了完整的玉米C<sub>4 </sub>型<i>pepc</i>基因. 测序结果与GenBank中登录的玉米C<sub>4</sub> 型<i>pepc</i>基因序列进行比对分析表明, DNA序列的同源性达98.96%, mRNA同源性达99.38%, 蛋白质的氨基酸序列同源性达99.38%, 在DNA水平, 两者之间有49处碱基差异, 18处发生在内含子区, 18处发生在外显子处. 在mRNA水平, 两者之间有15处差异, 但是这些差异在蛋白质水平上仅导致了4个非连续排列的氨基酸差异. 构建了该基因的农杆菌二元表达载体pBAC214. 通过PDS/1000He基因枪转化法, 获得了该基因的转基因小麦. 对转基因小麦进行的Southern杂交, 结果表明来自玉米的鉴定<i>pepc</i>基因完全整合到了小麦基因组中. 通过对转基因小麦叶片的可溶性蛋白质SDS-PAGE电泳分析, 表明该基因在小麦中获得了正确的转录、剪接和翻译. 通过对转基因小麦叶片中PEPC酶活性的初步测定, 发现部分转基因植株叶片中PEPC酶活性提高了3-5倍, 与玉米叶片中的PEPC活性相当. 对转基因小麦旗叶光和生理指标的测定, 发现部分转基因植株光合速率有所提高, 并且气孔的开放程度与叶片中的PEPC活性紧密相关. 说明完整的玉米C<sub>4 </sub>型<i>pepc</i>基因在小麦中可以正确表达和起到一定的生理作用.
引用本文（GB/T 7714）
立全 张, 绪清 陈, 凤萍 杨, 等. 玉米C&lt;sub&gt;4 &lt;/sub&gt;型&lt;I&gt;pepc&lt;/I&gt;基因的分子克隆及其在小麦的转基因研究[J]. Chinese Science Bulletin (Chinese Version), 2004.
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