细胞色素c氧化酶可溶性Cu<italic><sub>A</sub>结构域的表达、分离纯化和初步表征</italic>
摘要
细胞色素c氧化酶亚基Ⅱ含有可溶性双核铜中心Cu<italic><sub>A</sub></italic>结构域蛋白.报道了<italic>Paracoccus versutus</italic>菌Cu<italic><sub>A</sub></italic>结构域的基因克隆、表达和分离纯化及其初步表征.编码Cu<italic><sub>A</sub></italic>结构域的基因插入pET11d质粒载体中,于<italic>E.coli</italic> BL21(DE3)中进行表达.结果表明,Cu<italic><sub>A</sub></italic>结构域蛋白在这个表达体系中主要以包涵体的形式存在,表达量占菌体总蛋白的10%左右.经尿素溶解,Cu<sup>+</sup>/Cu<sup>2+</sup>重组复性,Q-Sepharose快速阴离子交换柱和Sephadex-G75凝胶过滤柱纯化,得到了电泳纯的紫红色可溶性蛋白.紫外-可见吸收光谱在478 nm有较强吸收峰,530 nm处有一肩峰,在360和806 nm处有弱吸收峰,它们可归属为混价双金属核中心(Cu<sub>2</sub>S<sub>2</sub>R<sub>2</sub>)中Cu-S和Cu-Cu间的电荷转移与轨道相互作用.圆二色谱表明其二级结构主要为<italic>β</italic>-折叠形式.荧光激发谱最大波长为280 nm,发射谱最大波长为345 nm.
引用本文（GB/T 7714）
毅 谢, Waal E.de, Gerard W. Canters, 等. 细胞色素c氧化酶可溶性Cu&lt;italic&gt;&lt;sub&gt;A&lt;/sub&gt;结构域的表达、分离纯化和初步表征&lt;/italic&gt;[J]. Chinese Science Bulletin (Chinese Version), 2001.
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