嗜热古细菌Sulfolobus tokodaii脱卤酶在D-乳酸生产中的应用
摘要
将来源于嗜热古菌 Sulfolobus tokodaii 的脱卤酶( L -HAD ST )基因克隆到载体pET28b, 转化大肠杆菌BL21(DE3)进行表达, 在蛋白的N末端带有6个组氨酸融合标签, 纯化后经聚丙烯酰胺凝胶电泳显示融合蛋白的分子量约为25000. 融合蛋白催化2-氯丙酸(2-CPA)的最适反应温度为70℃, 最适pH值为9.5. 以外消旋2-CPA为底物生产 D -乳酸, 利用HPLC检测反应液中2-CPA及乳酸的变化, 发现 L -HAD ST 只催化 L -2-CPA脱氯反应. 对酶催化反应条件进行了优化, 结果表明, 在pH值为9.5, 温度为60℃的条件下, 当反应体系中缓冲液浓度为3 mol/L, 底物浓度为0.5 mol/L, 酶浓度为3×10 4 U/L时有较高的底物转化率及乳酸生成量. 依据条件优化结果可知, 影响反应速度的因素有底物浓度、缓冲液浓度以及酶浓度, 其中底物浓度变化对转换率的影响最明显.
引用本文（GB/T 7714）
解桂秋, 潘东, 何文龙, 等. 嗜热古细菌Sulfolobus tokodaii脱卤酶在D-乳酸生产中的应用[J]. 高等学校化学学报, 2015.
引文网络
本站仅收录题录与摘要供学习参考，全文版权归属出版方；如有侵权请联系我们删除。