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缺氧、复氧条件下低氧反应元件（HRE）对心肌细胞转染hVEGF165基因表达的调控作用

董红燕、张中明、闫英群

2006Acta Scientiarum Naturalium Universitatis SunyatseniImmunology and Microbiology被引 0

摘要

目的：探讨缺氧、复氧条件下，低氧反应元件（HRE）作为氧条件基因表达控制开关，对心肌细胞转染rAAV-HRE9-hVEGF165基因表达的调控作用。方法：分离新生sD大鼠心肌细胞，采用无血清培养，将在HEK293T细胞进行包装后获得的腺相关病毒转染培养的心肌细胞。实验共分为8组：Ⅰ组（空白对照组）：常氧培养24h（氧浓度21％）；Ⅱ组（缺氧对照组）：常氧培养16h，缺氧8h（氧浓度1％）；Ⅲ组（转基因对照组）：常氧培养24h；Ⅳ组（转基因缺氧1组）：转基因后缺氧8h；Ⅴ组（复氧1组）：常氧培养16h，缺氧8h、复氧4h；Ⅵ组（复氧2组）：常氧培养16h，缺氧8h、复氧8h；Ⅶ组（复氧3组）：常氧培养16h，缺氧8h、复氧12h；Ⅷ组（转基因缺氧2组）：转基因后常氧培养16h，缺氧20h。ELISA法测定培养液VEGF蛋白含量；细胞免疫荧光染色及RT-PCR分别检测细胞内VEGF蛋白及VEGF165 mRNA的表达。结果：95％的培养心肌细胞可见自律搏动，cTn-I染色阳性率为86％；病毒转染率约为87％。Ⅳ、Ⅴ、Ⅷ组培养液中VEGF蛋白含量显著高于其它各组（P〈0．01），细胞免疫荧光VEGF蛋白染色昼阳性；RT-PCR测定显示，Ⅳ、Ⅴ及Ⅷ组可见484bp目的条带。结论：rAAV-HRE9-hVEGF165可成功地转染原代培养心肌细胞，在缺氧环境下，受HRE的调控，VEGF165 mRNA及VEGF165蛋白可有效表达，而在常氧状态下，目的基因的表达及蛋白合成即行中止。

引用本文（GB/T 7714）