pTARGET-TCR Vβ5．2真核表达质粒的构建及表达
摘要
目的构建含大鼠TCR Vβ5．2基因的重组真核表达质粒。方法以RT-PCR法扩增Lewis大鼠脾脏淋巴细胞的TCR Vβ5．2基因片段，将目的基因直接克隆到真核表达载体pTARGET中，构建重组质粒pTARGET-TCR Vβ5．2。连接产物转化E．coli JM109细胞后进行蓝白斑筛选，并经菌落PCR和DNA测序进行鉴定。将重组质粒以肌注法免疫Balb／c小鼠，用RT-PCR和免疫组化方法分别检测重组质粒在注射部位的转录和表达。通过脂质体介导，将重组质粒转染COS-7细胞进行瞬时表达，用免疫细胞化学染色法检测目的基因在真核细胞内的表达。结果测序鉴定证实，TCRv茚．2基因已被正确插入到pTAR．GET载体中，并检测到肌肉组织和COS-7细胞内目的蛋白的表达。结论成功构建了重组真核表达质粒pTARGET-TCR Vβ5．2，为进行TCR VβDNA疫苗对胶原诱导性关节炎大鼠保护作用的研究提供了基础。
引用本文（GB/T 7714）
马丽平, 李蕴, 赵文明, 等. pTARGET-TCR Vβ5．2真核表达质粒的构建及表达[J]. 免疫学杂志, 2007.
引文网络
本站仅收录题录与摘要供学习参考，全文版权归属出版方；如有侵权请联系我们删除。