实时荧光定量RT-PCR检测原发性肝细胞癌中Dicer mRNA的表达
摘要
目的：建立Dicer mRNA表达量检测的实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR）系统，检测肝癌细胞系与20例原发性肝细胞癌（primary hepatocellular carcinoma，PHC）组织中Dicer mRNA的表达水平。方法：根据Dicer mRNA的全序列设计特异性引物，结合荧光染料SYBR GreenⅠ，RT-PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度，进行熔解曲线分析排除非特异性扩增，根据标准品绘制标准曲线，由软件自动计算出待测样品Dicer mRNA的准确含量，并以Dicer mRNA和18S rRNA含量的比值作为Dicer表达水平的指标。结杲：该方法检测的线性范围为5×10^2～5×10^9copies／μl，样本的批内变异系数与批间变异系数为4．13％～19．72％和6．25％～18．76％。Dicer mRNA在HBV阳性肝癌细胞系HepG2．2．15和HBV阴性肝癌细胞系HepG2的表达水平明显低于正常肝细胞系WRL-68（P〈0．05）；在PHC组织的表达水平明显低于癌旁配对组织（P〈0．05）。结论：该方法具有较好的灵敏度、特异性和重复性。Dicer mRNA表达量在肝癌细胞系和PHC组织中的检测为以后更好的研究PHC的发病机制奠定了理论基础。
引用本文（GB/T 7714）
王玉兰, 王爱华, 陈允硕, 等. 实时荧光定量RT-PCR检测原发性肝细胞癌中Dicer mRNA的表达[J]. 第二军医大学学报, 2006.
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