广西巴马小型猪α-1，3半乳糖转移酶基因真核表达载体的构建及鉴定
摘要
目的通过RT-PCR扩增巴马小型猪GGTA1基因，分析其序列的结构特点并构建真核表达载体。为生产GGTA1基因沉默的广西巴马小型猪奠定基础。方法根据NCBI上发布的猪α-1，3半乳糖转移酶基因cDNA序列（AF221508），设计合成一对含有HindⅢ和BamHI酶切位点的特异性引物，以广西巴马小型猪肝脏组织总RNA为模板进行RT-PCR，所得目的片段经纯化、克隆、鉴定和测序；将目的基因与pEGFP-N1进行双酶切后连接构建真核表达载体pEGFP-GGTA1，通过测序，双酶切鉴定。结果所克隆的广西巴马小型猪GGTA1基因存在缺失第五外显子（81．116）的GGTA1序列。序列全长1080bp和未缺失第五外显子的GGTA1序列，全序列为1116bp。构建两个表达载体（缺失第五外显子pEGFP．GGTA1-1、未缺失第五外显子pEGFP-GGTA1-2）。结论广西巴马小型猪GGTA1基因存在第五外显子缺失的现象，通过对GGTA1基因克隆序列进行分析以及构建两个真核表达载体，为后面在猪源PK-15细胞中对其进行表达鉴定以及巴马小型猪α-1,3半乳糖转移酶基因的沉默实验奠定基础。
引用本文（GB/T 7714）
郭晓萍, 陈时锦, 兰干球, 等. 广西巴马小型猪α-1，3半乳糖转移酶基因真核表达载体的构建及鉴定[J]. 实验动物与比较医学, 2012.
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