人端粒酶催化亚单位（hTERT）反义分子探针的制备与理化性质初步研究
摘要
制备放射性核素99Tcm标记的针对人端粒酶催化亚单位（human telomerase reverse transcriptase，hTERT）mRNA的反义分子探针，探讨其在体外的稳定性和相关理化性质。针对hTERTmRNA（GEN—BANK号为AF015950）的第2331～2348位核苷酸（含18个碱基），即5LTCAAGAGCCACGTCTCTA-3’（hTERTSON），设计反义寡核苷酸序列（hTERTASON）为5’-TAGAGACGTGGCTCTTGA-3’；对hTERTASON进行适当修饰。通过双功能螯合剂S-Acetyl NHS-MAG。进行放射性核素99Tcm标记。针对影响标记的主要因素（SnCl：用量、反应体积、反应时间等）进行条件摸索，建立最优化标记方案。纸层析法测定反义分子探针（99Tcm-hTERTASON）的标记率和放射化学纯度，计算比活度。检测”Tcm-hTERTASON的放射稳定性与序列稳定性，以及血清蛋白结合率。所有结果通过统计学软件SPSS12．0进行分析。室温下反应15～30min后，99Tcm-hTERTASON的标记率为76％±5％（n=5）；在相同条件下，无双功能螯合剂作用，ASON的标记率仅为5．0％±1．6％（n=5）；二者比较有显著差异（P〈0．05）。99Tcm-hTERTAs0N放射化学纯度达到96％以上，比活度为1850GBq／g。在不同条件下，99Tcm-hTERTASON的放射化学纯度在24h内均达到93％以上。PAGE凝胶电泳显示99Tcm-hTERTASON在与人新鲜血清37℃孵育6h内未发生任何降解。与人新鲜血清37℃孵育1、3和6h后，99Tcm-hTERTASON的血清蛋白结合率分别为15．0％±1．6％、18．0％±1．9％和20．0％±2．4％。99Tcm-hTERTASON具有较高标记率、放射化学纯度和比活度；其放射稳定性和序列稳定性均良好，与血清蛋白结合率较低，适合作为反义显像剂用于进一步研究。