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同时表达4-1BBL B7．1及B7．2三个共刺激分子基因小鼠肝癌细胞系的建立和意义

李国强、王学浩、印洁、俞悦

2006中国肿瘤临床Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 0

摘要

目的：建立同时表达4-1BBL、B7．1及B7．2三个共刺激分子基因小鼠原发性肝细胞癌（hepatoeellular carcinoma，HCC）细胞系。方法：将B7．1和B7．2全长cDNA的质粒酶切，构建pcDNA3．1-B7．1-IRES-B7．2重组子，酶切法鉴定。用阳离子脂质体（Lipofectamine Reagent）将重组子转染H22，经均霉素（Hygromycin，300μg／ml）筛选，阳性克隆命名为H22-CD80／CD86^＋细胞。逆转录-聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）检测目的基因在H22-CD80／CD86^＋变异株的表达。采用同样方法将pCI-neo-4-1BBL质粒转入H22-CD80／CD86^＋细胞。G418筛选，阳性克隆命名为H22-CD80／CD86／CD137L^＋细胞。流式细胞仪检测三种基因在细胞克隆中的表达。结果：pcDNA3．1-B7．1-IRES-B7．2重组子经酶切鉴定，同时获得B7．1（862bp）和B7．2（984bp）目的基因片段和5．6kbp线性化pcDNA3．1载体片段；重组子测序结果与Genebank中B7．1和B7．2序列相符，证实构建成功。RT-PCR及FCM检测结果显示B7．1、B7．2及4-1BBL基因分别在H22-CD80／CD86^＋细胞及H22-CD80／CD86／CD137L^＋细胞中获得稳定、高效联合表达。结论：pcDNA3．1-B7．1-IRES-B7．2重组子构建正确，H22-CD80／CD86／CD137L^＋变异株可同时稳定表达B7．1、B7．2和4-1BBL三个共刺激分子基因。

引用本文（GB/T 7714）