人肝癌PLC/PRF-5细胞中干细胞样细胞的分离及其特异性miRNAs的筛选
摘要
目的：分选及鉴定人肝癌PLC/PRF-5细胞中的肝癌干细胞样细胞,研究其microRNAs（miRNAs）表达谱。方法：以ABCG2为表面标志,免疫磁珠法分选、流式细胞术检测ABCG2＋和ABCG2-PLC/PRF-5细胞,观察ABCG2＋与ABCG2-PLC/PRF-5细胞的琼脂克隆形成能力和接种NOD/SCID小鼠的成瘤能力。应用miRNA芯片筛选ABCG2＋和ABCG2-PLC/PRF-5细胞差异表达的miRNAs,real-time PCR验证部分差异表达的miRNAs。结果：免疫磁珠分选的ABCG2＋PLC/PRF-5细胞纯度可达（84.20±4.52）%。ABCG2＋PLC/PRF-5细胞比ABCG2-PLC/PRF-5细胞形成更多、更大的克隆集落（47.17±10.50 vs23.33±7.31,P〈0.05）;NOD/SCID小鼠接种1×104个ABCG2＋PLC/PRF-5细胞即可成瘤,而ABCG2-PLC/PRF-5细胞至少需要5×105个才可成瘤;5×105个细胞时,ABCG2＋PLC/PRF-5细胞组的肿瘤体积显著大于ABCG2-PLC/PRF-5细胞组[（3.73±1.19）cm3 vs（0.72±0.57）cm3,P〈0.01]。ABCG2＋PLC/PRF-5细胞和ABCG2-PLC/PRF-5细胞差异表达的miRNAs有20个：上调的13个,下调的7个;real-time PCR验证其中的hsa-miR-30a和hsa-miR-630的差异表达,其结果与miRNA芯片结果基本一致。结论：人肝癌细胞系PLC/PRF-5中ABCG2＋细胞具有肿瘤干细胞的特性;ABCG2＋和ABCG2-PLC/PRF-5细胞差异表达的miRNAs有20个,它们在肝癌发病中可能起重要的调控作用。