胰岛素样生长因子1（IGF—1）mRNA同源模板竞争性PCR定量方法的建立
摘要
胰岛素样生长因子1(IGF-1)是一种多功能的细胞增殖调控因子,其表达水平受多种因素的影响,为了研究IGF-1基因在转录水平上的调控机制,建立了定量测定IGF-1mRNA的竞争性PCR方法.同时,也建立了一种简便的制备同源性竞争模板的方法.以构建好的重组pUC-IGF-1质粒为基础,利用IGF-1 mRNA序列上唯一存在,但是在pUC18质粒上多拷贝的MspⅠ酶切位点,以该限制性内切酶处理重组pUC-IGF-1质粒.在T4 DNA连接酶作用下对酶切产物进行随机连接,以连接产物作为模板,用可扩增IGF-1 cDNA的引物进行PCR,由此得到因含有随机插入序列而与原IGF-1 cDNA产生明显长度差别的重组IGF-1.以不同浓度的该DNA片段作为同源竞争模板与大鼠肝组织cDNA在同一反应体系中进行PCR,对PCR产物进行分析,计算出样本中IGF-1 cDNA的初始浓度.成功地建立了IGF-1 mRNA的竞争性PCR定量检测方法,为研究IGF-1基因的表达调控奠定了基础,同时也为对已克隆的基因进行mRNA定量测定提供了一种简便和灵敏的手段.
引用本文（GB/T 7714）
梁东春, 郭刚, 郭若霖, 等. 胰岛素样生长因子1（IGF—1）mRNA同源模板竞争性PCR定量方法的建立[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 2003.
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