首页 / 资料库 / 文献详情

共表达野生型p53及siRNA-mdm2质粒的构建及其在PC-3细胞中的表达

邵月婷、刘雅楠、邵晨、汲坤、李晓洁、Li Feng Li Feng、张灵、赵丹

2010吉林大学学报：医学版Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 0

摘要

目的：构建可同时表达野生型p53（wt—p53）及siRNA—mdm2的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法：利用亚克隆、T—A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3．1-p53、siRNA—mdm2、p53／siRNA—mdm2和siRNA—scramble重组质粒。脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞，半定量RT-PCR和Western blotting检测共表达质粒对mdm2和p53表达的影响，MTT法检测共表达质粒转染后PC-3细胞增殖活性。结果：克隆出wt—p53全长及带有U6启动子的siRNA—mdm2序列，经DNA测序证实序列正确，通过连接成功构建上述真核重组表达载体；转染细胞48h后可见siRNA—mdm2组GFP明显表达；RT—PCR和Western blotting检测显示转染共表达质粒后PC-3细胞中wt—p53表达增强，mdm2表达下调；MTT检测显示共表达质粒转染后PC-3细胞生长抑制率为40．4％。结论：成功构建p53与siRNA—mdm2共表达质粒，共表达质粒可抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖。

引用本文（GB/T 7714）