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H5N1禽流感病毒微磁粒捕捉系统和SYBR Green I荧光定量RT-PCR检测方法的建立

张坤、Gang Li、贾凤芹

2009Acta Scientiarum Naturalium Universitatis SunyatseniBiochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 0

摘要

利用禽流感H1N1抗体包被微磁珠制备免疫磁珠，再通过抗原抗体反应得到了含有N1亚型的病毒，然后设计针对H5亚型的特异性引物，同时构建含有H5亚型HA基因部分序列的标准质粒，定量后作为模板，建立了可以检测H5亚型禽流感病毒的SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR（RRT—PCR）方法。结果表明，制备的免疫磁珠可以吸附4个血凝单位的H5N1流感病毒和5个血凝单位的H1N1流感病毒，而对H9N2亚型流感病毒无特畀性结合，从而可以富集N1亚型的流感病毒。H5亚型RRT—PCR检测灵敏度可达到4．6拷贝／μL，线性范围达5个数量级；特异性强，与NDV和H1、H9亚型禽流感病毒不发生交叉反应。因此，利用该方法可以很好地检测H5N1禽流感病毒。

引用本文（GB/T 7714）