干扰素α-2b对人类早幼粒白血病细胞株HL-60细胞的抑制增殖与促进凋亡的作用
摘要
背景：儿童急性白血病复发的主要根源是微小残留白血病细胞的存在，在试图清除微小残留病的众多治疗方法中，免疫生物治疗越来越受重视。以前的研究发现干扰素d-2b能有效抑制神经母细胞瘤和恶性淋巴瘤患儿体内肿瘤细胞的增长，其能否抑制白血病细胞的增长？ 目的：通过体外实验观察干扰素d-2b对白血病细胞的影响。 设计：以人类早幼粒白血病细胞株HL-60为观察对象，对比观察实验。 单位：青岛大学医学院附属医院儿科研究所细胞培养室、免疫实验室、细胞室。材料：HL-60细胞系由山东省医学科学院基础所提供。干扰素α-2b购自Megagene公司，FITC-兔抗鼠Ig工作液（CatEK001）和CD13抗人单克隆抗体工作液（Cat．DK013Y）购自协和干细胞基因工程有限公司。 方法：体外建立HL-60细胞培养体系，调整细胞浓度为1×10^9L^-1，分为对照组和实验组，各实验组中加入终含量分别为5×10^5，1×10^6，2×10^6，5×10^6，1×10^7U／L的干扰素α-2b，对照组加入等量生理盐水，继续培养48h。光镜下采用瑞氏染色观察HL60细胞的形态变化，采用吖啶橙，溴化乙锭（AO／EB）双染色观察细胞凋亡，通过CD13蛋白表达测定观察细胞膜抗原表达及成熟分化，通过MTT实验检测HL-60细胞增殖活性。 主要观察指标：根据HL-60细胞核染色质是否均匀一致及着色情况，判断细胞是否发生凋亡；根据酶标仪检测的吸光度（一值）判断HL-60细胞增殖情况；根据CD13阳性细胞数量判断HL-60细胞成熟程度。 结果：①HL-60细胞凋亡：培养48h，当干扰素d-2b为5×10^5U／L时，以早期凋亡细胞为主，当干扰素α-2b含量为1×10^7U／L时，以晚期凋亡细胞为主，HL-60细胞凋亡率均高于对照组，差异有显著性意义（r=23.79，29．57，P〈0．01）。②HL-60细胞增殖情况：当干扰素d．2b含量为2×10^6U／L和1×10^7U／L时，�