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pcDNA3.1-KISS-1真核表达载体的构建及其对EC1细胞转移的抑制作用

L. Nuo Nuo、李珊珊、张红艳、轩小燕、郑献召、王丰、闫爱华

2009Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 0

摘要

目的克隆人食管组织KISS-1基因及构建真核袁达载体pcDNA3．1-KISS-1，并观察其在食管癌EC1细胞中的表达及对EC1细胞侵袭及运动能力的影响。方法从人正常食管组织中提取总RNA，设计特异性引物，通过逆转录-聚合酶联链反应（RT-PCR）扩增KISS-1基因cDNA序列，并将其克隆到真核表达载体pcDNA3．1中，构建真核表达质粒pcDNA3．1-KISS-1，酶切鉴定及测序分析后用Lipofectamine脂质体将其转染到食管癌细胞，Western blot法检测其蛋白在EC1细胞中的袁达情况；应用细胞运动实验及重建基底膜侵袭实验分析KISS-1表达对EC1细胞运动和侵袭能力的影响。结果成功克隆了人KISS-1基因全长编码序列，构建了重组真核表达载体pcDNA3．1-KISS-1，脂质体转染后KISS-1基因在EC1细胞中成功袁达；转基因组细胞的运动能力（174．6±14．24）和体外穿越重建基底膜的能力（90．44±12．83）明显低于转空质粒组（222．6±30．08，110．22±15．87）和对照组EC1细胞（234．40±14．72，124．78±18．14）（P均〈0．05）。结论重组pcDNA3．1-KISS-1真核表达质粒构建成功，并且KISS-1对食管癌细胞的侵袭和运动能力具有抑制作用。

引用本文（GB/T 7714）

DOI：https://doi.org/10.3971/j.issn.1000-8578.2009.04.002