NK4蛋白在大肠埃希菌中的表达、纯化、复性及活性测定
摘要
目的在大肠埃希菌（E.coli）中高表达NK4蛋白,经鉴定、纯化、复性后测定其生物学活性。方法采用重组DNA技术对已有质粒pGEX-4T-1-NK4和pBV220-HGFα进行改造,构建质粒pBV220-NK4,并使其转化E.coliBL21（DE3）,温控诱导表达目的蛋白NK4。蛋白鉴定采用SDS-PAGE和Western blot;蛋白纯化采用包涵体超声破碎、洗涤和Sephacryl-S200凝胶过滤层析。经梯度稀释复性后,采用MTT法和免疫细胞化学方法检测重组蛋白NK4对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell,HUVEC）ECV304增殖的作用。结果重组质粒pBV220-NK4酶切图谱和序列测定与预期一致。SDS-PAGE显示有相对分子质量49 000的目的蛋白,表达量为30%。Western blot结果证实目的蛋白带有NK4的氨基端,经包涵体洗涤、层析后NK4的纯度为95%。复性后的NK4可抑制ECV304增殖,并抑制ECV304增殖细胞核抗原（proliferating cell nuclearantigen,PCNA）的表达。结论我们建立了NK4的原核高表达体系及纯化制备工艺,所制备的NK4蛋白具有生物学活性,为大规模制备有活性的NK4及深入研究其相关功能奠定了基础。
引用本文（GB/T 7714）
常冰梅, 刘晓军, 李美宁, 等. NK4蛋白在大肠埃希菌中的表达、纯化、复性及活性测定[J]. Acta Scientiarum Naturalium Universitatis Sunyatseni, 2011.
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