TIMP-3 N端结构域重组腺病毒载体的构建与鉴定
摘要
目的构建N-TIMP3重组腺病毒载体，为深入研究组织金属蛋白酶抑制因子-3（tissue inhibitor of metalloproteinases-3，TIMP-3）N端结构域对胰腺癌的作用奠定基础。方法PCR扩增编码人TIMP3信号肽及其N端结构域的DNA序列，定向克隆至空载穿梭质粒pShuttle-CMV，构建重组穿梭质粒pShuttle-N-TIMP3，并测序鉴定。将重组pShuttle-N-TIMP3转化BJ5183感受态细菌，与其内的腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组，构建重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3，并经酶切与PCR鉴定。将线性化的重组载体转染QBI-293A细胞包装病毒，TCID50法检测病毒滴度，用Western印迹检测目的蛋白的表达。结果重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3经鉴定正确，病毒滴度为5×10^8 PFU／ml，并检测到目的蛋白的表达。结论成功构建了重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3。
引用本文（GB/T 7714）
朱自强, 郑马庆, 余莹, 等. TIMP-3 N端结构域重组腺病毒载体的构建与鉴定[J]. 医学分子生物学杂志, 2008.
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