人IL-31基因克隆、表达及在皮肤炎症中的作用
摘要
目的克隆人IL-31基因,构建原核表达载体,并诱导其在大肠杆菌中表达,研究hIL-31蛋白与皮肤炎症的关系。方法采用RT-PCR克隆人IL-31基因,将其克隆到原核表达载体pET28a（＋）,并通过IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中表达,用该目的蛋白刺激人表皮角质细胞HaCaT,RT-PCR检测趋化因子MIP-3β、TARC及TCA-3（I-309）mRNA的表达;小鼠皮内注射该目的蛋白,观察局部炎症表现,皮肤标本HE染色观察皮肤炎性特征,采血进行白细胞计数及分类,ELISA法检测血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平,流式细胞仪分析胸腺及脾脏T细胞亚群。结果成功获得495bp的人IL-31基因,原核表达质粒构建正确,IPTG诱导目的基因在大肠杆菌中大量表达;该目的蛋白可刺激HaCaT表达趋化因子MIP-3β、TARCI、-309;小鼠皮肤注射部位有脱毛,HE染色可见炎性细胞浸润,外周血白细胞总数增加,中性粒细胞比例增高,血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平增高,脾脏CD4＋T细胞百分比增高,CD8＋T细胞百分比减少。结论人IL-31基因克隆及原核表达已获成功,hIL-31蛋白可刺激HaCaT细胞表达MIP-3β、TARC、I-309,诱导小鼠皮肤炎症反应。
引用本文（GB/T 7714）
黄俊琼, 谢宇锋, 盛伟华, 等. 人IL-31基因克隆、表达及在皮肤炎症中的作用[J]. 免疫学杂志, 2007.
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