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人端粒酶催化亚单位（hTERT）特异性核酶对乳腺癌细胞MCF-7活性的作用及影响

樊丽、罗速、姜锐

2008北华大学学报：自然科学版Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 0

摘要

目的 探讨端粒酶特异性核酶对乳腺癌细胞MCF-7端粒酶活性、增殖和凋亡的影响．方法 设计合成RZ基因，构建人端粒酶锤头状核酶真核表达质粒pcDNA3．1（＋）．hTERT—RZ，测序鉴定．提取MCF-7细胞总RNA，RT-PCR扩增靶基因的cDNA片段，插入载体pMD18-T并测序鉴定．将核酶重组体及hTERT载体体外转录，琼脂糖凝胶电泳检测RZ的切割活性．核酶载体转染乳腺癌细胞MCF-7，RT—PCR法检测核酶重组子转染效率及核酶转染细胞中hTERTmRNA的表达量，TRAP法测定细胞端粒酶活性，MTT法、流式细胞仪测定细胞增殖及凋亡．结果 测序表明pcDNA3．1（＋）-hTERT-RZ和pMD18-T-hTERT构建成功．5％琼脂糖凝胶电泳表明体外转录出RZ和靶基因hTERT，RZ对靶基因hTERT具有切割活性．构建好的核酶真核表达载体转染乳腺癌MCF-7细胞，发现其潜伏期延长，对数生长期减缓，S期细胞比例降低，G1期细胞比例增高（P〈0．01）．端粒酶活性检测发现端粒酶活性明显降低．结论 端粒酶催化亚单位特异性核酶对靶基因hTERT在体外和体内均有催化切割活性，该核酶在乳腺癌MCF-7细胞中抑制hTERT的表达和细胞增殖，为核酶应用于恶性肿瘤的基因治疗提供了实验依据和新型工具酶．

引用本文（GB/T 7714）