TM-TNF-α介导的反向信号下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达
摘要
目的：观测TM-TNF-α介导的反向信号对sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的影响，构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变体，并进一步验证。方法：sTNF-α激活U937细胞后撤除，加入可溶性TNFR（sTNFRⅠ）激活TM-TNF-α介导的反向信号，用RT—PCR方法检测反向信号对活化后U937细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA的影响；采用分子克隆技术构建TM-TNF-α胞浆段缺失突变重组体，采用电穿孔法转染U937，并用Western blot检测蛋白表达。结果：sTNF-α激活U937细胞后撤除，高表达的细胞因子IL-1β、IL-8 mRNA随着时间的延长而逐渐降低；sTNFRⅠ激活的TM-TNF-α介导的反向信号可加速细胞因子mRNA的降解，且使mRNA降解至50％的时间分别由约75、60分钟缩短至约45、35分钟。成功构建TM-TNF—α胞浆段缺失突变重组体pcDNA3．0-△csTM-TNF—α并瞬时转染U937细胞，Western blot结果显示U937细胞膜表面除表达26000的野生型TM-TNF-α蛋白外，还可表达约20000的突变体蛋白。这种缺失胞浆段的突变体蛋白可竞争性抑制反向信号对活化后U937细胞因子mRNA的下调作用。结论：TM-TNF-α介导的反向信号可下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达；且TM-TNF-α胞浆段为其介导的反向信号所必需。
引用本文（GB/T 7714）
辛利军, 李清芬, 冯玮, 等. TM-TNF-α介导的反向信号下调sTNF-α激活后U937细胞因子mRNA的表达[J]. 中国免疫学杂志, 2006.
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