LC-MS／MS法测定血浆中山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度及其在大鼠药动学研究中的应用
摘要
目的：建立能够灵敏、特异、准确、可靠地测定血浆中山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度的分析方法。方法：优化山奈酚-3-O-芸香糖苷（kaempferol-3-O-rutinoside，NFR）的离子化及其断裂方式，确定相关液相色谱条件，选择能有效地从血浆样品中提取NFR的样品前处理方法；开展方法学考察，以验证新建分析方法的准确性、精密度等，在此基础上将该方法用于分析大鼠静脉注射NFR后所得的实际血浆样品，以验证新建分析方法的适用性。结果：ESI（＋）为NFR提供最佳的离子化条件，采用SRM工作模式，用m／z595→287来检测NFR。同时，以左旋千金藤啶碱（1-Stepholidine）为内标物化合物（IS），其SRM检测采用m／z328→178。NFR及IS的色谱保留时间（tR）分别为2．3和2．2min。用乙酸乙酯（EtOAc）提取经HCl酸化的大鼠血浆样品，NFR和IS的回收率分别为58．5％～70．1％和72．5％。NFR和IS在整个分析过程中稳定。在0．192～600ng·ml^-1的浓度范围内，对NFR与IS的峰面积比值和NFR的血药浓度进行线性回归，其回归曲线线性良好（r=0．9999，n=6×5）。批内准确性为92％～107％，其精密度为1．0％～5．7％；批间准确性为94％～99％，其精密度为1．5％～8．4％。本方法的LLOQ为0．192ng·ml^-1。大鼠静脉给药单剂量NFR（30 mg·kg^-1）后，NFR的消除半衰期（T1/2）为1．27 h、体内平均滞留时间（MRT）为0．32 h，NFR在大鼠体内的清除率（CL）为2．73 L·h·kg^-1、稳态分布体积（VSS）为0．92 L·kg^-1。结论：应用LC-MS／MS技术建立的测定血浆中山奈酚-3-O-芸香糖苷浓度的新方法灵敏可靠，这项研究工作为全面开展NFR注射液的临床前药代动力学研究打下了重要的分析方法学基础。