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重组Thermus thermophilus DNA聚合酶表达纯化及其在RT-PCR中的应用

王峤、相世和、母凯萍、母敬郁、王恩思

2006中国生物制品学杂志Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 0

摘要

目的 研究重组Thermus thermophilus DNA聚合酶的表达、纯化和应用。方法 提取Thermus thermophilus hb8基因组DNA作为模板，PCR扩增Tth DNA聚合酶基因后，克隆至pET28a表达载体上，转化大肠杆菌BL21（DE3），经IPTG诱导表达，用His-Bind Quick Cartridse 300纯化重组Tth DNA聚合酶His—tag融合蛋白。提取Thermomonospora fusca总RNA，用一管法RT—PCR扩增E2cd基因，检测重组Tth DNA聚合酶RT—PCR活性。结果 大肠杆菌表达Tth DNA聚合酶，分离出的电泳纯重组Tth DNA聚合酶His—tag融合蛋白相对分子质量为94000，表达产量为200000U／L。一管法RT-PCR可扩增出850bp长度的E2 cd基因。结论 重组Tth DNA聚合酶已成功地表达和纯化，并用于RT—PCR。

引用本文（GB/T 7714）