烟草丛顶病毒（TBTV）ORF3和ORF4的原核表达、抗血清制备及应用
摘要
为制备烟草丛顶病毒（TBTV）ORF3和ORF4多克隆抗体,采用RT-PCR方法克隆了TBTV保山龙陵分离物（TBTV-BSLLi）的ORF3和ORF4,亚克隆至pMD18-T载体中,经测序正确后,将该基因插入原核表达载体pET28a（＋）中,通过热击转化大肠杆菌（Escherichia coli）BL21（plysS）,以IPTG诱导6×His融合蛋白的表达,并经Ni2＋亲和柱层析纯化,成功地克隆了TBTV的ORF3和ORF4,建立了其原核表达和表达产物的纯化体系,获得了高纯度的ORF3、ORF4蛋白。用纯化的蛋白免疫大白兔,获得高效价的特异性抗血清。DAS-ELISA检测结果表明,制备的抗血清可用于田间烟草（Nicotiana tabacumL.）样品及传播介体的检测。本研究为用血清学方法检测该病毒提供了基础条件。
引用本文（GB/T 7714）
龙亚芹, 王万东, 左瑞娟, 等. 烟草丛顶病毒（TBTV）ORF3和ORF4的原核表达、抗血清制备及应用[J]. 农业生物技术学报, 2011.
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