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应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱和N端测序鉴定重组人粒／巨噬细胞集落刺激因子（rhGM—CSF）的结构

王红霞、杨松成

2001Acta Scientiarum Naturalium Universitatis SunyatseniBiochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 0

摘要

目的：应用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱（MALDI－TOF－MS）和N端测序方法鉴定重组人粒／巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF)的结构。方法：1．用Edman降解法进行N端测序。2．应用MALDI－TOF－MS测定分子量并鉴定纯度。3．通过还原、烷基化确定rhGM-CSF分子中二硫键数目。4．通过蛋白内切酶Glu-C酶切的肽质量指纹谱确证氨基酸序列并确证其中两对二硫键的配对。结果：1．测定的rhGM-CSF N端15个氨基酸序列与从cDNA推导的序列一致。2．测定的rhGM-CSF分子量与理论计算值一致。3．证明rhGM-CSF没有自由巯基，含有两对二硫键，与理论值一致。4．证明rhGM-CSF的氨基酸序列是正确的，并确证其中的两对二硫键配对正确。结论：确证重组人粒／巨噬细胞集落刺激因子（rhGM-CSF)的结构是正确的，没有修饰、变异和氨基酸的丢失。应用的方法灵敏、准确、可靠。

引用本文（GB/T 7714）