转录因子GATA-1与人巨细胞病毒 UL111A 基因5'上游序列结合的实验研究
摘要
目的：利用人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HCMV）潜伏及再激活感染THP-1细胞模型，研究细胞核内转录因子GATA-1与HCMV UL111A基因5’上游DNA序列的相互作用。方法：采用免疫印迹（Western blotting）技术定量分析HCMV潜伏及再激活感染时细胞核内转录因子GATA-1的表达；通过MATCH工具软件分析UL111A基因5’上游DNA序列，发现存在着11个GATA-1的结合位点，针对这11个GATA-1结合位点DNA序列设计9对引物，采用染色质免疫沉淀（chromatin immunoprecipitation，ChIP）及实时荧光定量PCR技术分析转录因子GATA-1与UL111A基因5’上游DNA序列的结合情况。结果：HCMV潜伏感染时UL111A基因未表达cmvIL-10，激活感染时表达cmvIL-10，潜伏感染时转录因子GATA-1的相对表达量高于激活感染；以GATA-1抗体特异性结合的DNA片段为模板，9对引物中共有5对扩增出目的条带；HCMV潜伏感染组和激活感染组5个位点转录因子GATA-1结合率分别为：-4．00±0．26、-4．50±0．33、-4．41±0．21、-3．61±0．20、-3．47±0．11和-1．13±0．07、-0．63±0．05、-1．10±0．07、-0．24±0．03和-0．14±0．01，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论：HCMV感染时转录因子GATA-1可能通过与UL111A基因5’上游序列1119（-3760）位点、107（-4772）位点、609（-4270）位点、849（-4030）位点和2047（-2832）位点结合，调节UL111A基因的转录，参与HCMV潜伏与再激活感染的过程。