质粒介导的AmpC β-内酰胺酶共有抗原表位的预测及原核表达
摘要
目的：应用生物信息学方法预测质粒介导的AmpCβ-内酰胺酶（pAmpCs）共有抗原表位，并实现pAmpCs共有抗原表位-Trx融合蛋白的原核表达、纯化和鉴定。方法运用多序列比较工具找出各型质粒介导的AmpC β-内酰胺酶的共有相对保守区域，并利用分子生物学软件Biosun预测各亚型pAmpCs的可及性、抗原性、抗原表位、柔性、亲水性等参数，通过综合分析后找出其共有的抗原表位区域pAmpCs1。根据大肠杆菌的密码子偏好性，把氨基酸序列pAmpCs1转变为核苷酸序列pampcs1，采用重叠延伸PCR合成pampcs1片断，并构建原核表达载体pET32a（＋）／pampcs1。通过测序验证，对含有该重组质粒的大肠杆菌B121（DE3）进行诱导表达，表达产物经SDS-PAGE电泳分析后，用Ni-NTA亲和层析法纯化pAmpCs1-Trx融合蛋白，利用Western blot方法鉴定融合蛋白的抗原性。结果：根据预测结果找到了一段各型pAmpCs共有的抗原表位区域pAmpCs1，成功构建了原核表达载体pET32a（＋）／pampcsl，经IPTG诱导后得到了分子量约为23kDa的融合蛋白，经Ni-NTA亲和层析柱纯化后，通过Western blot鉴定该蛋白能被抗AmpC β-lactamases多抗识别。结论：成功构建了pAmpCs1-Trx融合蛋白原核表达载体，并获得了高纯度的pAmpCs1—Trx融合蛋白，初步证明它的抗原性，为制备特异性抗体及建立快速检测方法打下了良好的基础。
引用本文（GB/T 7714）
郭建巍, 杨林西, 吴素香, 等. 质粒介导的AmpC β-内酰胺酶共有抗原表位的预测及原核表达[J]. 未知来源, 2008.
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