條件式誘導綠螢光蛋白在斑馬魚心臟專一表現之Tet-on system
摘要
Tet-on system 是以Doxycycline（Dox）誘導系統啟動，使目標基因進行轉錄。此系統雖已應用於老鼠中，但是，在模式魚種斑馬魚尚未建立。本實驗利用zebrafish cardiac myosine light chain 2（cmlc2）啟動子驅動此系統，誘導後能在心臟專一表現綠螢光蛋白報導基因（GFP）。將此基因構築後，經基因轉殖分別得到兩株質體構築方式不同之轉殖魚品系T03及T21，分別觀察及比較此兩株轉殖魚報導基因的表現，在幼魚誘導的實驗部分：兩株轉殖魚之結果類似，在早期皆會受到卵膜的阻礙，以10 ug/ml Dox誘導轉殖品系24-hpf之胚胎，在7小時後看到綠螢光在心臟專一性出現；但去除卵膜則可於18-hpf進行誘導。經Dox誘導3-dpf之轉殖品系的胚胎，並利用Kodak 1D.3.5進行綠螢光定量分析，發現綠螢光亮度與誘導的時間及濃度具正相關：當誘導濃度（0.01、0.1、1及10 ug/ml）越高，誘導的時間越久（0至96小時），綠螢光的表現越強，誘導72小時後綠螢光亮度增加的趨勢漸緩，至誘導96小時，綠螢光趨近飽和，與誘導120小時之螢光亮度並無明顯差異。在成魚誘導部分：誘導兩個月大的T21品系之成魚，GFP在心臟專一表現之趨勢與3-dpf之幼魚誘導結果大致相同。在移除Dox實驗之部分：以10 ug/ml Dox誘導3-dpf之T21品系1小時，在移除Dox後，綠螢光持續增加至處理後三天，之後便下降，五天綠螢光已完全消失，受到Dox之調控，但T03觀察不到移除Dox後螢光下降之現象。總結以上比較，T21之質體構築方式會得到適用性較廣的轉殖魚品系。本實驗成它a在斑馬魚建立Tet-on system，預期將來對於基因弁鄋漪膍s、基因治療或是藥物篩選皆為十分有用的工具。