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H—2K^b—BSP融合基因在大肠杆菌中的表达与纯化

钱丽、钱书兵、钱关祥

2002细胞与分子免疫学杂志Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 0

摘要

目的 构建可生物素化H-2K^b－BSP融合基因的表达载体。方法 采用PCR技术，从pBluescript(+)-K^b中扩增出H-2K^b基因的胞外区，拼接上依赖BirA酶的可生物素化序列后，克隆入pET-42b(+)高效表达载体进行诱导表达。并对表达产物进行纯化与复性。结果 成功地构建了融合表达载体pET-H-2K^b－BSP，对表达产物进行纯化与复性，并应用仅识别完整构象的抗K^b分子的单克隆抗体对复性后产物进行了检测。证明表达产物已部分恢复了构象。结论 获得H-2K^b－BSP融合蛋白的高效和表达，为研究在原核系统中表达，纯化与复性，以及进一步利用亲和素在体外构建MHC－I类分子四聚体，探讨免疫识别机制奠定了基础。

引用本文（GB/T 7714）