首页 / 资料库 / 文献详情

马铃薯腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因（sAGP）的克隆及其在毕赤酵母中的表达

宋波涛、柳俊、谢从华、成善汉

2005农业生物技术学报Biochemistry, Genetics and Molecular Biology被引 0

摘要

用RT-PCR结合RACE的方法,在腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶小亚基基因(sAGP)的保守位点设计1对引物,从低温处理的马铃薯(Solunumtaberosus L.)块茎cDNA中,扩增出1条约1.9kb的特异性条带,并将其克隆到pBluescript SKⅡ载体.DNA序列测定结果表明,目标片段为sAGP,全长为1 854bp,包含一个1 563 bp的开放阅读框架,编码521个氨基酸.5'端有63 bp的非翻译区,3'端包含219bp的非编码序列,3'端poly(A)尾端上游12和19 bp处有加尾信号AATAAA.该基因已在GenBank注册,登记号为AY1 86620.将该基因PCR突变后,克隆到酵母表达载体pMETα-B中,构成表达载体pMETαA4,将其线性化,用电穿孔法导入Pichia-methabolica pMAD16,得到重组表达酵母,经甲醇诱导表达后,SDS-PAGE电泳显示,在诱导表达重组酵母中检测到50 kD左右的特异蛋白带.裂解酵母菌体提取蛋白质,进行酶活力活性测定,结果表明诱导表达重组酵母中AGPase活性明显上升,证明诱导表达成功.

引用本文（GB/T 7714）