hTERT启动子调控腺病毒介导的HSV—tk／GCV基因系统治疗前列腺癌的实验研究
摘要
目的探讨人端粒酶逆转录酶启动子（hTERT）驱动的重组腺病毒Ad—hTERT—HSV-tk结合环氧鸟苷（GCV）对人前列腺癌的治疗作用。方法①体外实验；用携带启动子hTERT的重组腺病毒Ad—hTERT—EGFP以及携带小鼠巨细胞病毒（CMV）启动子的重组腺病毒Ad—CMV-EGFP分别感染人前列腺癌细胞LNCaP及人正常成纤维细胞MRC-5，根据报告基因EGFP表达的不同计算病毒的细胞转染率。MTT法评估GCV对分别感染Ad—hTERT-EGFP、Ad—CMV—EGFP、Ad—hTERT—HSV—tk和Ad-CMV-HSV-tk的MRC-5细胞及LNCaP细胞的杀伤作用。②体内实验：建立人前列腺癌BALB／C裸鼠移植瘤模型，将成瘤裸鼠按随机表法分为4组，每组10只。A组为治疗组，肿瘤局部注射1．0×10^9 PFU／ml的AdhTERTHSutk病毒上清0．1ml，第1、5、10天各1次，第2～15天腹腔注射GCV100mg·kg^-1·d^-1；B组为AdhTERT—HSV-tk对照组，注射Ad-hTERT—HSV-tk同A组，第2～15天腹腔注射PBS；C组为GCV对照组，肿瘤局部仅注射PBS0．1ml，第1、5、10天各1次，注射GCV同A组；D组为阴性对照组。比较各组肿瘤体积、瘤重及肿瘤抑制率。结果①体外实验：当感染复数（MOI）=10时，Ad—CMV—EGFP在MRC-5及LNCaP中的转染率分别为88．41％及90．23％，二者比较差异无统计学意义（P〉O．05），而Ad—hTERT—EGFP在MRC-5及LNCaP中的转染率分别为0及66．67％，二：者比较差异有统计学意义（P〈0．01）。MOI=100，GCV=1000μg／ml时，Ad—hTERT-EGFP、Ad-CMV-EGFP、Ad—hTERT—HSV-tk和Ad—CMV—HSV—tk对MRC-5细胞的抑制率分别为0、0、1．1％和98．4N，对LNCaP细胞的抑制率分别为0、0、97．4％和99．4％。②体内实验：荷瘤裸鼠治疗后第14天，A、B、C和D组肿瘤体积分别为82．56、132．85、135．03和174，07mm^3；各组移植瘤重量分别为（0．49±0．22）、（1.17±0．18）、（1.35±0．19）和（1.46±0．13）g；A组的肿瘤体积和重量明显小于�